生物科技成果：ERT-PCR

ERT-PCR技术平台：世界上最灵敏的核酸检测技术

严重急性呼吸综合征( severe acute respiratory syndrome, SARS) 是由SARS冠状病毒引起的传染性强、病死率高的疾病。 其传播的主要途径是通过近距离呼吸道飞沫传播。 SARS发病的潜伏期约为3到10d。与其他病毒不同，SARS-CoV感染早期的患者体内病毒数量相对较少，给疾病的早期诊断带来了困难。因此，需要采用高灵敏度的方法检测才可能避免假阴性结果。 并能及时准确地发现疫情，报告给政府协调部门，尽早采取有效的防控措施。鉴于SARS给人类健康和社会经济带来的巨大危险，准确有效地检测疑似人群和环境 样本，对于避免误诊、漏诊尽早采取隔离措施防止病毒传播，以及制定正确的诊疗方案具有重要意义。灵敏、可靠、便捷的检测方法正是布好这第一道防线重中之 重。

于常海充分发挥在微量基因检测方面的专长，依托自有资金和技术，将一种新型实时定量PCR技术――增强型荧光实时定量PCR（enhanced real-time PCR, ERT-PCR）应用于SARS病毒的检测。他们创造性地使用这种技术方法检测了一百余例SARS疑似病人，检测效果明显好于现有的其它方法。ERT-PCR检测平台，灵敏度比常规PCR高10⁷倍，比实时荧光定量PCR高1000倍，为目前世界上灵敏度最高的核酸检测技术，成功应用于检测早期极微量SARS病毒感染。ERT-PCR技术扩大了阴性和弱阳性样本间的差异，增加了阴阳性样本间的辨识度，增强了用户界面友好性使操作人员能更容易清晰辨认结果。

这种高灵敏度的技术省时、简单，适合在医疗前线推广， 对于SARS患者的快速确诊、及时采取治疗措施并控制病毒扩散有重要意义，对其它传染性疾病的监测和诊断也具有广泛应用价值。ERT-PCR技术是在结合 常规PCR和TaqMan RT-PCR技术的基础上开发出来的。该技术常先采用一对针对SARS-CoV RNA 聚合酶基因的特异性引物对样本进行PCR扩增，PCR产物经测序后证明与目的基因序列一致，以确保扩增引物的特异性。然后以PCR产物为模板，进行下一步 的TaqMan RT-CR，并在反应的每一步中加入适当的阴性对照和阳性对照。在以检测技术的灵敏性和特异性作为推广应用关键因素时，ERT-PCR在此方面显示出其不 可替代的优越性。于常海教授在SARS病毒早期检测方面取得突出进展，其研究成果与SARS爆发第一时间发表于BBRC和《新英格兰医学》杂志(《New England Journal of Medicine》2004, 350: 1577-1579)，《科学》杂志对此通讯进行专门评论。于常海是SARS爆发期间SARS防治公关组成员。因为在SARS诊断的突出表现，于常海和合作单位获得了国家863科技项目的资助，并系列研发出多重荧光PCR平台，可与一次反应可诊断多种相似症状的病原体，不仅降低实验成本，且提高检测效率和通量。有利于疫情的快速诊断辨别。已经或正在经过临床验证的平台有：流感的多亚型的诊断，登革热通用型和四种亚型的诊断等。其稳定性和灵敏性和操作简单、时效性强受到用户和市场的肯定。